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乙烯利刺激對檀香葉中總黃酮含量的影響

【目的】建立檀香葉總黃酮含量的測定方法,分析乙烯利刺激對檀香葉中總黃酮含量的影響。【方法】采用紫外分光光度法測定檀香葉中總黃酮含量。【結果】未經刺激的檀香葉總黃酮含量在6967~7281 mg/g之間。經過刺激的檀香葉總黃酮含量在10571~16798 mg/g之間(http://big.hi138.com/)。【結論】乙烯利刺激能提高檀香葉中總黃酮含量。

名貴中藥檀香為檀香科Santalaceae檀香屬Santalum植物檀香Santalum album L的樹幹心材,性溫味辛,入脾、胃、肺經,具有理氣溫中、開胃止痛的功效[1]。檀香原產於印度、印度尼西亞等地,1962年我國開始從印尼引種檀香[2],到目前為止廣東省引種檀香面積已經超過333335公頃。

植物激素刺激在一定程度上能促使檀香提前結香,提高揮發油含量且不影響檀香品質[3-5]。目前國內外對檀香研究的報道主要集中於檀香栽培種植技術和檀香揮發油組分分析以及檀香藥材質量評價上[6]。本研究在乙烯利刺激檀香結香試驗的同時,分析測定了檀香葉中總黃酮含量,並探討了乙烯利刺激對其含量的影響。

1 材料、儀器與試劑

1.1 實驗材料及處理檀香葉樣品采自廣東省湛江南藥試驗場,樹齡均為5年,采集時間和處理方式見表1。乙烯利刺激為在檀香樹幹距地面20 cm處鉆孔,用膠帶封好洞口後,註射一定量不同濃度的乙烯利溶液,註射相同量水即為水刺激。采集部位為檀香樹中上部,檀香原植物經廣東省中藥研究所邱金裕研究員鑒定為檀香科植物檀香Santalum album L.。采摘後的葉子自然平攤失水後50℃烘幹,粉碎後過60目篩,幹燥器中室溫密封保存。表1不同樣品采集時間和處理方式(略)

1.2 儀器與試劑8453E型紫外可見分光光度計(美國Agilent);EP211D電子分析天平(德國)

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 蘆丁對照品溶液的制備精密稱取經105℃幹燥至恒重的蘆丁標準品適量,加甲醇溶解並定容至50 mL,配成03048 mg/mL的蘆丁標準溶液(医药学/临床医学論文 http://big.hi138.com/)。

2.1.2 樣品溶液的制備精密稱取檀香葉粉末(過3號篩)10 g,置於索氏提取器中,加石油醚(60℃~90℃)150 mL,水浴回流提取25 h以上,直至石油醚無色,揮盡樣品中的石油醚,加甲醇150 mL,再置水浴鍋中索氏回流提取4 h以上,直至甲醇無色,冷卻後濾過,並用甲醇少量多次洗滌濾器,濾液轉移至250 mL的容量瓶中,甲醇定容至刻度,制得供試品溶液。

2.2 波長的選擇取對照品溶液和樣品溶液適量,移入25 mL的容量瓶中,加入甲醇至6 mL,各加50 g/L的亞硝酸鈉溶液10 mL,振搖後放置6 min,再加入100 g/L的硝酸鋁溶液10 mL,搖勻後放置6 min,加10 mol/L氫氧化鈉溶液10 mL,用甲醇定容至刻度,搖勻後放置15 min。以 0 mL為空白,采用紫外—可見光分光光度法[1],在200~800 nm波長範圍內進行掃描,結果對照品和樣品在500 nm處均有最大吸收,見圖1。

2.3 標準曲線的繪制分別精密量取蘆丁標準溶液0、100、200、300、400、500、600 mL,按22項下方法操作顯色,以加0 mL為空白,在500 nm處測定吸光度,以溶液中蘆丁的量為橫坐標,以吸光值為縱坐標,繪制標準曲線,得直線回歸方程為Y=10671X-0001(r=0999 1),線性範圍0012 2~0073 2 mg/mL。

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2.4 方法學考察

2.4.1 精密度試驗取對照品溶液,按照22項下方法,在波長500 nm處測定吸光度,連續測定5次,結果其吸光度的均值為04619,sR為031%,表明精密度良好。

2.4.2 重復性試驗精密稱取同一供試品10 g,平行5份,按212項下方法提取及22項下方法測定其黃酮含量,結果含量均值為7023 mg/g,sR為035%,表明該方法的重復性較好。

2.4.3 穩定性試驗取同一供試品溶液,分別在0、15、30、45、60 min測定其吸光度,結果其吸光度均值為04693,sR為150%,說明供試品溶液在60 min內穩定。

2.4.4 加樣回收率試驗精密稱取已測含量的樣品S1(含量6967 mg/g),加入蘆丁進行回收率試驗,結果其平均回收率為10032%,sR為203%,見表2。表2回收率試驗結果(略)
2.5 樣品測定分別吸取上述供試品溶液各25 mL,移入25 mL的容量瓶中,按22項下方法進行測定,各樣品吸光度值代入回歸方程計算出樣品總黃酮含量,10個樣品的總黃酮含量見表3。表3不同處理方法檀香葉中總黃酮的含量(略)

對表3中未刺激組和刺激組數據進行成組設計的假設檢驗,方差齊性檢驗結果顯示兩組數據方差不齊,采用t′檢驗,結果表明未刺激組和刺激組的總黃酮含量差異具有顯著性意義(P<001)。從表中也可以看出刺激後的樣品總黃酮含量遠高於未刺激樣品的。對於刺激組內,不同的刺激處理組間比較差異無顯著性意義。刺激2個月後檀香葉總黃酮含量均顯著升高,刺激4個月後葉中總黃酮含量雖有所下降,但仍顯著高於刺激前葉中總黃酮含量。

3 討論

黃酮類化合物是植物體內重要的次生代謝產物,也是體內具有生理活性的主要成分之一[7]。有關檀香葉中黃酮類成分的含量還未見報道,本研究考慮黃酮類作為植物體內一種重要的活性物質,采用紫外分光光度法對總黃酮含量進行測定分析,結果發現從未經刺激的檀香植株上不同時間采集的檀香葉總黃酮含量無明顯差異,但刺激後檀香葉中總黃酮含量顯著高於未刺激者,何種原因導致這種差異有待進一步研究。此外,雖然不同濃度乙烯利刺激和水刺激都能提高檀香葉中總黃酮的含量,但目前檀香藥材的主要利用部位為樹幹心材,乙烯利刺激不僅能提高檀香葉中總黃酮含量,還能使檀香樹幹心材提前結香[5] ,而水刺激不能,因此乙烯利刺激是值得研究的處理方法。

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